• Document: Evaluación del desempeño analítico del diagnóstico molecular de leishmaniasis cutánea. Cielo Maritza León Ramos
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Evaluación del desempeño analítico del diagnóstico molecular de leishmaniasis cutánea Cielo Maritza León Ramos Universidad Nacional de Colombia Facultad de Medicina, Departamento de Salud Pública Bogotá, Colombia 2017 Evaluación del desempeño analítico del diagnóstico molecular de leishmaniasis cutánea Cielo Maritza León Ramos Trabajo de investigación presentado como requisito parcial para optar al título de: Magister en Infecciones y Salud en el Trópico Director: Juan David Ramírez González, Ph.D. Codirectora: Myriam Consuelo López Páez, M.Sc. Línea de Investigación: Diagnóstico Molecular Grupo de Investigación: Grupo de Investigaciones Microbiológicas (GIMUR), Universidad del Rosario Universidad Nacional de Colombia Facultad de Medicina, Departamento de Salud Pública Bogotá, Colombia 2017 DEDICATORIA A Dios. Por su inmensa bendición y amor. A mi padres Teresa Ramos y José León A mis hermanos Yolanda, William, Nelson y Erika A todos mis sobrinos A mi Ángel Juan Ricardo Cubides y mi segunda familia Quienes han sido, son y serán mi motivación, inspiración, apoyo y por brindarme todo su amor, paciencia y confianza en el transcurso de esta etapa “Dime y lo olvido, enséñame y lo recuerdo, involúcrame y lo aprendo.” Benjamin Franklin. Agradecimientos A Dios Al Dr. Juan David Ramírez, Director de tesis y a la Dra. Myriam Consuelo López, Codirectora de tesis, por su asesoría, orientación, conocimiento e infinita paciencia. A Marina Muñoz y Carolina Hernández por sus consejos, enseñanzas y asesorías que fueron un aporte valioso para la realización del proyecto de investigación pero aún más importante, por brindarme su amistad. A mis compañeros del Grupo de Investigaciones Microbiológicas de la Universidad del Rosario (GIMUR): Luz Patiño, Adriana Higuera, Maira Wintaco, Lissa Saavedra, Claudia Sánchez, Giovanny Herrera y a la Profesora Dora Ríos. A mis compañeros de Centro de investigaciones en Microbiología y Parasitología Tropical de la Universidad de los Andes CIMPAT: Gisell Molina y su bebé, Marla López, Diana Toro, Laura Tamayo, German Aguilera y a la Profesora Camila González. Al Instituto Nacional de Salud, Grupo de Parasitología, por la financiación de reactivos y préstamo de equipos. A la Universidad Nacional de Colombia, Maestría Infecciones y Salud en el Trópico, por la formación académica que me otorgó. A mi compañera y amiga incondicional de maestría, Angie Johana Sánchez, porque valió la pena todo el esfuerzo, dedicación, lágrimas y noches en vela para alcanzar nuestro propósito. A todos muchas gracias! Resumen y Abstract VII Resumen Las leishmaniasis comprenden un espectro de enfermedades parasitarias producidas por protozoos del género Leishmania. Colombia es uno de los 3 países con mayor número de especies de Leishmania que afectan a los seres humanos y la leishmaniasis cutánea es la forma clínica más frecuente observada en el país. Colombia no cuenta con un estándar de oro para el diagnóstico de leishmaniasis cutánea, siendo el examen directo la prueba de elección, la cual reporta una baja sensibilidad que varía en función de varios aspectos. Recientemente, métodos moleculares se han utilizado en el diagnóstico permitiendo detectar ADN en cantidades mínimas; en muchos estudios moleculares no se evidencia una adecuada evaluación del desempeño analítico de la técnica y blancos genéticos empleados, parámetros necesarios para hablar de sensibilidad y especificidad analítica. El objetivo de este trabajo fue evaluar el desempeño analítico de las técnicas de PCR convencional, PCR en tiempo real y LAMP para el diagnóstico molecular de las principales especies causantes de leishmaniasis cutánea determinando la exclusividad e inclusividad, Rango Reportable Anticipado, límite de detección, repetibilidad, precisión y porcentaje de positividad de las tres plataformas moleculares. Se concluyó que el marcador molecular ADNk utilizado en estos ensayos, a pesar de ser el más sensible, no cumple con el criterio de exclusividad de la técnica, el HSP70 presentó un límite de detección bajo en PCR convencional y similar en qPCR y LAMP, también presentó una baja reproducibilidad y en LAMP no cumplió con el criterio de exclusividad, finalmente el marcador 18S presento el mejor desempeño analítico en las tres plataformas. Palabras clave: Diagnóstico, Leishmania, LAMP, PCR, qPCR, desempeño analítico. Abstract The Leishmaniasis inc

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